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Bio-techne|IHC/ICC/IF 抗体哪家强?适用范围早知道

免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)和免疫荧光(IF),姑且称为定位检测抗原表达的「三驾马车」,是生物学研究中常用的免疫学实验。

三种方法原理相似,易于混淆。实验人员在挑选抗体产品时常常有这样的困惑,某一种应用的抗体是否也适用于另外两种实验?是,也不是。具体要视不同品牌而定,下面让我们为您一一解惑:

「三驾马车」的应用有何不同?

首先,我们一起了解下三种检测方法的区别。IHC 应用的样本类型是组织,ICC 的样本类型是细胞,而 IF 则是采用荧光标记抗体实现组织/细胞中目的蛋白的定位。其中,IHC 更可以根据组织切片的形式分为 IHC-P(石蜡切片)及 IHC-Fr(冰冻切片)。

Bio-Techne 的抗体产品选择的特别之处在于,不会显示单独的 IF 应用,而是与 ICC 合并为一类:ICC/IF。因而,涉及三种检测方法的应用标识主要分为:ICC/IF,IHC(IHC-P、IHC-Fr)。

左上,IHC:使用 HIF-1 alpha 抗体(Novus,NB100-105)在人肾脏中染色 HIF-1 alpha;右上,ICC:使用 10 µg/mL IRAK4 抗体(Novus,NBP1-77231)和 HRP 偶联的二抗在 K562 细胞中检测到 IRAK4 的表达。细胞用 DAB 染色(棕色),细胞核用苏木精(蓝色)复染。左下,基于组织的 IF:使用 1 μg/mL 的 GAP-43 抗体(Novus,NB300-143)及 AlexaFluor® 488 标记的二抗,检测 E15.5 小鼠胚胎的石蜡切片中 GAP-43 的表达。DAPI 用于细胞核复染;右下,基于细胞的 IF:使用 15 µg/mL 的 IRAK4 抗体(R&D Systems,AF3919)及 NorthernLights™ 557 偶联的二抗(红色)在 THP 1 细胞中检测 IRAK4。用 DAPI(蓝色)对细胞核进行染色。

 

如何挑选合适的 IHC/ICC/IF 抗体?

在了解三种检测方法的差别之后,我们回到文章开头的问题,一种抗体是否可以在三种检测方法中通用?换句话说,如何挑选适用于自身实验的抗体呢?

Bio-Techne 旗下两大抗体品牌 R&D Systems® 与 Novus Biologicals®,在抗体的适用范围(IHC/ICC/IF)描述方面存在差异:

1。 R&D Systems® 品牌的抗体在产品页面显示已经验证的种属(Species)及应用 (Applications),这些应用通常在说明书中会有详细的信息。

[特别注意] R&D Systems® 品牌抗体应用中 IHC 或者 ICC/IF 只要有一项,则可以适用于 IHC 及 ICC/IF 的应用。一般来说,应用中包含「IHC」的抗体同时适用于 IHC-Fr 及 IHC-P,除非说明书中另有声明。

例如,巨噬细胞标志物 CD68(货号 MAB20401)抗体,应用栏中仅标出了 ICC/IF,虽然不能确定一种抗体在每一种组织中都有同样的表现,但我们可以证明其对固定抗原的识别,所以也可应用于 IHC 实验。


温馨提示:若说明书中没有 IHC 以及 ICC/IF 的应用说明,表明我们没有任何数据来支持相应的应用,即不能保证实验结果。 

2. 同样的,Novus Biologicals® 抗体产品页面也显示出所有经过验证的种属(Species)及应用 (Applications)。值得一提的是,除 Novus Biologicals® 实验室验证的种属及应用外,部分数据也来自于客户的鼎力支持。

除此之外,还有些抗体包含 (-) 标志,代表验证过为阴性的种属或者应用,不建议您再次进行尝试。

[特别注意] Novus Biologicals® 的 IHC 与 ICC/IF 两种应用不能通用,这一点与 R&D Systems® 的规定有所不同。此外,若有单独标注 IHC 的子类(IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount),只验证用于单独标注的子类,如果只有 IHC 标志而无子类标志,则适用于所有的 IHC 切片类型。即:

  • 抗体 A 标注了 IHC,则可以应用于 IHC-P、IHC-Fr,未验证 ICC/IF;
  • 抗体 B 标注了 IHC,IHC-Fr,则可以应用于 IHC-Fr,未验证 IHC-P 及 ICC/IF;
  • 抗体 C 标注了 ICC/IF,则可以应用于 ICC/IF,未验证 IHC-P 及 IHC-Fr。

 

以自噬标志物 LC3B(NBP2-46892)为例,应用栏中标出了 ICC/IF,IHC,IHC-P,说明此产品已验证适用于 ICC/IF 和 IHC-P,未验证 IHC-Fr 实验。

根据品牌的不同,可以选择合适的官方验证过的抗体。谨记上述小贴士,开展实验不用愁。

 

 

以上文字和图片来源于Bio-techne

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